自動(dòng)DNA合成儀的操作要點(diǎn)

        1. 合成開始后的檢查點(diǎn)
        合成開始時(shí)，檢查第二個(gè)核苷酸 de-DMT 產(chǎn)生的橙色，以確保一切正常。 * DMT 的顏色不能用作提供信息的基礎(chǔ)，因?yàn)樗?* 裝載到載體中的核苷的量度。檢查合成柱是否泄漏。泄漏的原因可能是色譜柱錯(cuò)誤或色譜柱上的魯爾接頭和合成器沒有擰緊。檢查監(jiān)視器上的詳細(xì)信息并在必要時(shí)恢復(fù)所需的參數(shù)。
         2、試劑在DNA自動(dòng)合成儀上的穩(wěn)定性
        無(wú)論合成程度如何，試劑管道中的單體都需要每隔幾分鐘補(bǔ)充一次，不會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的亞磷酰胺分解。但如果儀器運(yùn)行時(shí)間不超過1小時(shí)，合成前必須清洗試劑管道，去除管內(nèi)分解的試劑。即使在這種條件下，試劑的壽命也是有限的。因此，在合成儀上存放超過 2 周的試劑應(yīng)丟棄；合成30堿基12 1-_寡核苷酸時(shí)，施磷酰胺和四唑在合成儀上的時(shí)間應(yīng)小于1周。合成50mer或更長(zhǎng)的寡核苷酸，應(yīng)使用新鮮的亞磷酰胺、四唑和乙腈。
         3. 自動(dòng)DNA合成儀上的試劑更換
        在合成過程中使用任何一種試劑都會(huì)導(dǎo)致合成失敗。因此，您必須在合成前檢查所有容器中的試劑量。如果實(shí)驗(yàn)室的溫度低于18~C，則需要使用吹風(fēng)機(jī)加熱儲(chǔ)液器以溶解一些晶體。如果某個(gè)位置配備了一次性塞子，請(qǐng)?jiān)趯⑿缕孔臃旁诤铣善魃蠒r(shí)檢查并更換塞子。不應(yīng)使用任何破裂的軟木塞，還應(yīng)檢查安全的軟木塞。另外，檢查試劑瓶邊緣是否有縫隙。缺口瓶未在合成儀上塞緊，試劑無(wú)法運(yùn)輸。
         4. 合成時(shí)更換試劑瓶。
        在特定循環(huán)中單體縮合、密封、氧化完成后，等待乙腈清洗，中斷循環(huán)和三列。然后按正常方法換瓶，取消所有中斷信息，重新開始合成。不要讓合成中斷超過 1 分鐘。這會(huì)降低耦合率或?qū)е潞铣墒　?/span>